Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

A ghrelin kardiovaszkuláris hatásainak vizsgálata Dr. Sax Balázs A molekulától a betegágyig, a sejttől a szervezetig PhD-kurzus, 2012.04.16.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "A ghrelin kardiovaszkuláris hatásainak vizsgálata Dr. Sax Balázs A molekulától a betegágyig, a sejttől a szervezetig PhD-kurzus, 2012.04.16."— Előadás másolata:

1 A ghrelin kardiovaszkuláris hatásainak vizsgálata Dr. Sax Balázs A molekulától a betegágyig, a sejttől a szervezetig PhD-kurzus, 2012.04.16.

2 Ghrelin  a növekedési hormon elválasztását serkentő receptor (GHS-R) endogén ligandja  28 aminosav  aktív formájá: Ser3 octanoil csoport (GOAT enzim)  keringő ghrelin 90%-a dezacilált (inaktív?)  elsősorban a gyomorban termelődik, de mRNS-e és receptora többféle szövetben megtalálható (pl. érendotél, szívizomszövet)  két receptor-altípus létezik: GHS-R1a (GPCR 7 TM) GHS-R1b (GPCR 5 TM)

3 Ghrelin mRNS kópia szám  Legmagasabb kópiaszámban: Gyomor fundus Vékonybél Tüdő Pankreász Vese Vastagbél Hipothalamus  Alacsonyabb kópiaszámban: Limfocita Szívizomszövet ( Gnanapavan et al. 2002 ) Ghrelin szöveti expresszió

4 GHS-R 1a mRNS kópiaszám GHS-R1a szöveti eloszlás Hipofízis Hasnyálmirigy Pajzsmirigy Lép Szívizomszövet ( Gnanapavan et al. 2002 )

5 GHS-R 1b mRNS kópiaszám GHS-R1b szöveti eloszlása Bőr Szívizomszövet Hipofízis Pajzsmirigy Hasnyálmirigy Vékonybél Vastagbél Máj Emlő Lép....

6 A ghrelin hatásai  Központi idegrendszeri hatások  növekedési hormon elválasztásának serkentése  táplálékfelvétel serkentése  bélmotilitás fokozása (n. vagus)  gyomorsav-termelés  Metabolikus hatások  zsírraktárak növelése  negatív korreláció az inzulinszinttel és a BMI-vel  Kardiovaszkuláris hatások www.phoenixpeptide.com Agy Hipofízis Étvágy Növekedés Kardio- vaszkuláris rendszer Metabolizmus Növekedési hormon Neuroendokrin sejt

7  Kardiovaszkuláris hatások : pertérfogatot és a verővolumen növelése pumpafunkció javítása krónikus szívelégtelenségben vérnyomás csökkentése (centrális és perifériás mechanizmus) kardioprotektív hatások: ischaemia-reperfúzióban csökkenti az infarktusméretet csökkenti az oxidatív stressz mértékét antiinflammatorikus hatás antiaritmiás hatás gátolja a szívizomsejtek apoptózisát serkenti az angiogenezist kétirányú érhatások

8 Vizsgálatok  Szívizom ghrelintermelésének vizsgálata ischaemiás szívbetegségben  Ghrelin direkt koronáriahatásának vizsgálata izolált kutya arteriolákon

9 Perikardiális folyadék ghrelintartalmának vizsgálata ischaemiás és non-ischaemiás szívbetegségben A ghrelin plazma és perikardiális koncentrációinak jellemzése iszkémiás (CABG) és nem iszkémiás (billentyűműtétre kerülő) betegcsoportokban. A ghrelinkoncentráció és egyes metabolikus és funkcionális kardiológiai paraméterek összefüggésének vizsgálata.

10 Perikardiális folyadék  eredetét tekintve főként miokardiális transzszudátum  több szíveredetű ágens a a plazmánál magasabb koncentrációban van jelen (pl. ET-1, ANP, adenin nukleozidok)  ischaemiás szívbetegségben ezen anyagok koncentrációja (pl. adenin nukleozidok) tovább emelkedhet  ezen magas lokális koncentrációban jelen lévő ágensek visszahathatnak a szívműködésre

11 Mintavétel és módszer BILLISCH betegszám4154 férfi/nő 15/26 43/11* kor (év) 661661661661 63  1 BMI (kg/m 2 ) 26,9  0,7 28,2  0,5 Diabetes mellitus 4/37 18/36 * HOMA-A 2,5  0,2 2,9  0,4 EF (%) 62  1 55  1 * * p<0,05 BILL vs. ISCH  intraoperatív perikardiális folyadék (PF) mintavétel és egyidejű centrális vénás vérvétel  aktív (acilált) és összes (acilált + dezacilált) ghrelin meghatározás (RIA), inzulin mérés (ELISA), echokardiográfiás és egyéb laboratóriumi paraméterek

12 * BILL vs. ISCH p<0,01 # PF vs. plazma p<0,01 Aktív és összes ghrelin koncentráció a plazmában és perikardiális folyadékban  magasabb perikardiális aktív ghrelin szint ischaemiás szívbetegségben  perifériás ghrelin szintek között nincs különbség  magasabb PF/plazma ghrelin arány az ISCH betegekben fokozott myocardialis ghrelin- termelés ISCH szívbetegségben fokozott myocardialis ghrelin- termelés ISCH szívbetegségben

13 Korreláció echokardiográfiás paraméterekkel  A perikardiális ghrelin szint a septummal nem, csak a bal kamrai hátsó fallal mutat összefüggést, ami a szabad kamra fal ghrelintermelő szerepére utalhat.  A bal kamrai izomtömeggel talált összefüggés hátterében vélhetőleg a BMI-vel mutatott negatív összefüggés áll. Összes beteg (n=95)EFEDDESDSWTPWTLVMRVTAPSE Plazma totál ghrelin R0.050-0.089-0.082-0.143-0.243-0.2750.0750.107 p0.6580.3930.4330.2710.0690.0380.5540.530 Perikardiális totál ghrelin R-0.070-0.0220.029-0.173-0.354-0.2490.0070.253 p0.5330.8330.7810.1810.0070.0610.9530.129 Plazma aktív ghrelin R-0.0480.000-0.002-0.133-0.252-0.1190.1600.198 p 0.9990.9840.3070.0600.3810.2050.239 Perikardiális aktív ghrelin R-0.1630.0290.074-0.097-0.306-0.1460.053-0.005 p0.1690.7950.5110.4870.0320.3160.6880.978 Perikardiális/ plazma totál ghrelin arány R0.161-0.086-0.1080.1530.2400.0460.090-0.247 p0.1460.4120.2980.2360.0720.7300.4750.139 Perikardiális/ plazma aktív ghrelin arány R0.132-0.022-0.121-0.0270.084-0.0180.1020.177 p0.2670.8400.2810.8440.5620.8970.4400.322

14 Összes beteg (n=95) Body mass index Össz- koleszterin Tri- glicerid Plazma glukóz Plazma inzulin HOMA-A index Plazma totál ghrelin R-0.2230.0540.145-0.163-0.288-0.326 p0.0300.6030.1660.1150.0060.002 Perikardiális totál ghrelin R0.003-0.0910.185-0.061-0.371-0.395 p0.9730.3860.0770.5570.000 Plazma aktív ghrelin R-0.159-0.0720.2010.018-0.192 p0.1280.4960.0570.8650.071 Perikardiális aktív ghrelin R0.000-0.0900.125-0.006-0.223-0.233 p0.9970.4190.2660.9570.0470.038 Perikardiális/ plazma totál ghrelin arány R0.192-0.1330.0810.185-0.192-0.157 p0.0610.2050.4420.0730.0670.135 Perikardiális/ plazma aktív ghrelin arány R0.037-0.088-0.064-0.008-0.045-0.060 p0.7430.4390.5720.9420.6900.596 Korreláció metabolikus paraméterekkel  A plazma összghrelin negatív korrelációja a testtömegindexszel és az inzulinrezisztenciával az irodalomból ismert összefüggés.  A perikardiális ghrelin szintek összefüggése a plazma inzulinszinttel és az inzulinrezisztenciával felveti a szénhidrátháztartás szabályozó szerepét a lokális ghrelintermelődésben.

15 Következtetések  Az emelkedett perikardiális ghrelin szint a krónikusan ischaemiás myocardium fokozott ghrelintermelésére utal.  Az echokardiográfiás és metabolikus paraméterekkel talált korrelációk a szabad kamrafal szerepére utalnak a perikardiális ghrelin termelődésében, valamint felvetik a széhidrát-háztartás szabályozó szerepét is.  A ghrelin sokrétű kardioprotektív szerepét figyelembe véve az észlelt fokozott ghrelintermelődés a krónikusan iszkémiás szívizom önvédő mechnizmusának része lehet.

16 A ghrelin direkt érhatásának vizsgálata izolált kutya koronária arteriolákon

17 - patkány / izolált szív és izolált koronária arteriola Pemberton et al. 2004 5-10 nM endotelin-1 42 mM KCl humán / izolált mezenteriális artéria szuperfúzió Dimitrova 2007 10 nM endotelin-1 tengerimalac / vese artéria gyűrű szuperfúzió Dimitrova et al. 2006 - malac / intrakoronáriás bolus Grossini et al. 2007 10 nM endotelin-1 humán / arteria mammaria gyűrű szuperfúzió Kleinz et al. 2006 10 nM endotelin-1 humán / arteria mammaria gyűrű szuperfúzió Wiley et al. 2002 - humán / a. brachialis infúzió alkari véráramlás növekedés Okumura et al. 2002 - patkány / iv. bolus - MAP esés Shinde et al. 2005 - humán / iv. infúzió - MAP esés Nagaya et al. 2001 PrekontrakcióFaj/modellSzerző ÉRÖSSZEHÚZÓDÁS ÉRTÁGULAT

18 Célkitűzések A ghrelin receptor altípusok (GHS-R1a, GHS-R1b) jelenlétének vizsgálata kutya koronária ereken. A ghrelin receptor altípusok (GHS-R1a, GHS-R1b) jelenlétének vizsgálata kutya koronária ereken. A ghrelin koronária arteriolákra kifejtett hatásának vizsgálata spontán és emelkedett értónus mellett. A ghrelin koronária arteriolákra kifejtett hatásának vizsgálata spontán és emelkedett értónus mellett. A GHS-R1a szerepének vizsgálata az érválasz létrejöttében. A GHS-R1a szerepének vizsgálata az érválasz létrejöttében.

19 A ghrelin receptorok vizsgálata immunhisztokémiával kutya koszorúereken → primer antitest: nyúlban termelt humán GHS-R1a, GHS-R1b elleni antitestek → detektálás: - biotinilált szekunder antitest - avidin-biotinperoxidáz komplex (ABC) - kromogénként diaminobenzidin (DAB) - háttérfestés hematoxylinnal → pozitív kontroll: kutya hipotalamusz GHS-R1a, GHS-R1b pozitív sejtek → negatív kontroll: elsődleges antitest elhagyása → antitestek validálása Western blot technikával 27kDa 35kDa 55kDa 70kDa 100kDa 130kDa 250kDa 15kDa 27kDa 35kDa 55kDa 70kDa 100kDa 130kDa 250kDa GHS-R1a 44 kDa GHS-R1b 32 kDa

20 a b c d e f g h i GHS-R1a immunpozitivitás Kutya hipotalamusz

21 a b c d e f g h i GHS-R1b immunpozitivitás

22 Inkubáció: - normál Krebs- Ringer oldat (nKR) - pH 7,4; 37 o C - buborékoltatás: 5%CO 2, 20%O 2, 75% N 2 - 50 Hgmm-es intralumináris nyomás szervopumpákkal - endotél funkció (teszt: 10 µM Ach) 210±16 µm) Intramurális koronária arteriola izolálás, kanülálás egészséges kutyaszívből (belső átmérő: 210±16 µm) Átmérőváltozás mérése mikroangiometria A ghrelin érhatásának vizsgálata izolált intramurális koronária arteriolákon

23 Protokoll 30 nM GHR 100 nM GHR 300 nM GHR 30 nM GHR 100 nM GHR 300 nM GHR nKR 20 min A Tromboxán analóg n=8 1  M U46619 B 30 nM GHR 100 nM GHR 300 nM GHR 30 nM GHR 100 nM GHR 300 nM GHR nKR 1  M U46619 1  M U46619 + 50  M D-Lys3-GHRP-6 20min GHS-R1a receptor specifikus blokkolószere n=8

24 * p<0,05, **p<0,01 normál tónus vs. U46619-prekontrakció (Student-féle egymintás t-próba), átlag±SEM Ghrelin hatása az érátmérőre izolált koronária arteriolákon

25 Ghrelin hatása az érátmérőre GHS-R1a receptorblokádban izolált koronária arteriolákon

26 Következtetések  A GHS-R1a és GHS-R1b receptorok jelen vannak a kutya koronária arteriolák falában.  A ghrelin kutya koronária arteriolákon megemelt tónus esetén érszűkítő hatással bír.  Bár a receptor jelen van az érfalban, a vazokonstriktor válasz nemGHS-R1a aktivációján keresztül jön létre - annak hátterében más receptoriális mechanizmus állhat.  Bár a receptor jelen van az érfalban, a vazokonstriktor válasz nem a GHS-R1a aktivációján keresztül jön létre - annak hátterében más receptoriális mechanizmus állhat.

27 Lehetséges receptoriális mechanizmusok o CD36 receptor (koronária szűkület ghrelin analógra, Bodart et al. 2007) o GHS-R1b receptor o 5-HT 2a receptor (bél simaizom kontrakció GHRP-származékra, Depoortere et al. 2006)

28 A CD36 közvetíti a ghrelin analóg hexarelin koronária perfúziós nyomást növelő hatását patkány izolált szív modellen. A CD36 közvetíti a ghrelin analóg hexarelin koronária perfúziós nyomást növelő hatását patkány izolált szív modellen. (Bodart et al. 2002)  Scavenger receptor, sejtfelszíni fehérje  Szöveti eloszlása: zsírszövet, vérlemezke, mikrovaszkuláris endothel sejtek, monocita/macrofág, miokardium  Szerepe: zsír metabolizmus, haemostasis, thrombosis, atherogenesis, gyulladás  Lehetséges jelátvitel: PKC és L-típusú kalcium csatorna aktiválás Ghrelin CD 36 PKC Ca CD36

29 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!


Letölteni ppt "A ghrelin kardiovaszkuláris hatásainak vizsgálata Dr. Sax Balázs A molekulától a betegágyig, a sejttől a szervezetig PhD-kurzus, 2012.04.16."

Hasonló előadás


Google Hirdetések