Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az endotélsejtek aktivációjának tanulmányozása aktivációs mintázat segítségével Dr. Cervenak László Semmelweis Egyetem, III. Sz. Belgyógyászati Klinika.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Az endotélsejtek aktivációjának tanulmányozása aktivációs mintázat segítségével Dr. Cervenak László Semmelweis Egyetem, III. Sz. Belgyógyászati Klinika."— Előadás másolata:

1 Az endotélsejtek aktivációjának tanulmányozása aktivációs mintázat segítségével Dr. Cervenak László Semmelweis Egyetem, III. Sz. Belgyógyászati Klinika Kutatólaboratórium Elméleti PhD Iskola Kurzusa- Molekulától a betegágyig, sejttől a szervezetig 2011/2012 Tanév Dr. Cervenak László Semmelweis Egyetem, III. Sz. Belgyógyászati Klinika Kutatólaboratórium Elméleti PhD Iskola Kurzusa- Molekulától a betegágyig, sejttől a szervezetig 2011/2012 Tanév

2 Kettős cél Az endotélsejtek szerteágazó működése A mintázat keresés, mint kutatási stratégia

3 Mit jelent a sejtaktiváció? Ehhez megelőzőleg nyugalomban kell lennie egy sejtnek!!! A legtöbb sejttípusnak van egy adott funkciója, tehát soha nincs nyugalomban Fehérvérsejteknél, bizonyos őssejteknél jól használható fogalom Más sejteknél inkább működésváltás lenne a helyesebb kifejezés Mai használatban az aktiváció sokszor ezt a működés- váltást jelenti

4 Endotélsejtek Gerincesekben jelentek meg millió éve 6*10 13 db 1 kg össztömeg 6 teniszpályányi felület Minden erünket (beleértve a nyirokereket és a szívet is) endotélsejtek borítják Jelentős morfológiai és funkcionális diverzitás az ér típusa (artéria, véna, venula, kapilláris, nyirokér) és az ellátott szerv (agy, máj, vese, stb.) szerint Környezeti és epigenetikus tényezők alakítják a diverzitást

5 Szérumfehérjék metabolizmusa Szérumfehérjék metabolizmusa Felvétel / lebontás Recirkularizáció Trombózis Koaguláció TC aggregáció Trombolízis Simaizom tónus (vérnyomás) Simaizom tónus (vérnyomás) Kontrakció Relaxáció Érszerveződés Endotél, simaizom, pericita proliferáció, migráció Gyulladás Kemotaxis Adhézió Leukocita aktiváció Adhézió Gördülés Megtapadás Transzmigráció Immunválasz Homing Ag-prezentáció Citokin termelés Permeabilitás- Permszelektivitás Permeabilitás- Permszelektivitás Szoros illeszkedés Intercelluláris rések Endotél sejtek által szabályozott folyamatok

6 Kevés NO Simaizom tónus  Simaizom proliferáció  Leukocita adhézió/aktiváció  Trombocita adhézió/aktiváció  Gyulladás beindulása  Sok NOPeroxinitrit (nitrozatív stressz)  Sejtaktiváció ≠ diszfunkció NO Nyugvó endotél NO Aktivált endotél Diszfunkcionális endotél eNOS szabályozó funkció kiesés Gyulladási út (NF  B) Véralvadási út Proliferációs út TNF  - IL-1,6,8- TF, vWf  Adhézió- VE-Cadherin+ MHC II- PDGF- TXA2- PGI2+ TNF   IL-1,6,8  TF, vWf  Adhézió  VE-Cadherin  MHC II  PDGF  TXA2  PGI2 

7 Mi az az aktivációs mintázat? Sok, az adott sejtre specifikus fenotípus marker egyidejű vizsgálatából összeálló kép In vivo Csak a mintavételezés „in vivo”, a mérés lehet a valamilyen laboratóriumi módszer is In vitro Már maga az aktiváció is in vitro sejtkultúrában történik

8 In vivo endotélsejt fenotípus mintázat Képalkotók Szérum/plazma faktorok Egyéb mérések CT, MRI, ultrahang, angiográfia stb. Intravitális mikroszkópia, mikroszkóp CT FMD Szolúbilis adhéziós molekulák, koagulációs faktorok, vazoaktív anyagok NO és végtermékeinek kimutatása vizeletből, kilélegzett levegőből Keringő endotélsejtek és progenitorok

9 In vivo endotélsejt fenotípus mintázat NO végtermékek NO 2 -, NO 3 - Lipid mediátorok PGI 2, PGD 2, PGE 2, LTB 4, TXA 2 Vazoaktív peptidek ET-1, ET-3 Koagulációs faktorok VWF, TM, THBS, TF, TFPI Fibrinolitikus rendszer tPA, uPA, PAI-1 Mátrix komponensek Kollagén IV, fibronektin, laminin Szolúbilis adhéziós molekulák sICAM-1, sICAM-2, sVCAM-1, sP-Selectin, sE-Selectin, sPECAM-1, sVE-Cadherin, sZO-1 Citokinek IL-1 , IL-1ra, IL-6, IL-8, MCP-1, TNF  MérhetőségSpecificitásRelevancia

10 In vitro endotélsejt fenotípus mintázat Több száz mérhető paraméter, több tucatnyi módszerrel Példa: Gyulladási faktorok összehasonlítása endotélsejt aktiváló képességük szerint Lipopoliszaccharid (LPS) Tumornekrózis faktor-  (TNF  ) Interleukin-1  (IL-1  ) Gyulladási citokinek termelése Adhéziós molekulák expressziója ROS termelés

11 Az LPS, TNF  és IL-1  génexpressziós mintázata LPS TNF  IL-1  *Zhao B., et al American Journal of Physiology, 284:C1577

12 Gyulladási aktivációs mintázat Kérdés: Jelátviteli, fehérjeexpressziós és funkcionális szinten is lehet-e találni különbséget köztük?

13 Gyulladási aktivációs mintázat Kontroll 3 perc 15 perc 60 perc LPS TNF  IL-1 

14 Gyulladási aktivációs mintázat

15 p38 MAPKJNK Akt

16 Gyulladási aktivációs mintázat TLR4 VE-Cadherin Mag TLR4 Golgi

17 Gyulladási aktivációs mintázat IL-6 IL-8 MCP-1

18 Gyulladási aktivációs mintázat E-SelectinICAM-1

19 Endotélsejt aktivációs mintázat IL-1  TNF  LPS NF  B p38 JNK NF  B p38 JNK Akt Ca-szignál E-Selectin ICAM-1 IL-6 IL-8 MCP-1 Erősség Sebesség

20 Mintázat keresés, mint stratégia Genomika Transzkriptomika Proteomika Metabolomika stb. Hipotézis alapú vizsgálatok Extrém adatmennyiség Bioinformatikai elemzés Kevés adat Irodalmi háttér Hagyományos statisztikai elemzés Mintázat keresés Átlátható mennyiségű adat Irodalmi háttér Hagyományos és bioinformatikai elemzés (LAD analízis)

21 Mikor használható? Omikai vizsgálatok megerősítése A sejtekre ható hasonló hatásmechanizmusú faktorok finom különbségeinek felderítése Betegségek patomechanizmusának vizsgálata

22 Köszönöm a figyelmet!


Letölteni ppt "Az endotélsejtek aktivációjának tanulmányozása aktivációs mintázat segítségével Dr. Cervenak László Semmelweis Egyetem, III. Sz. Belgyógyászati Klinika."

Hasonló előadás


Google Hirdetések