Programcsomag fejlesztése "multiplex microbead assay" eredmények kiértékelésére •Soft Flow Hungary Kft. •7628 Pécs, Kedves u. 24 Lustyik György

Az előadások a következő témára: "Programcsomag fejlesztése "multiplex microbead assay" eredmények kiértékelésére •Soft Flow Hungary Kft. •7628 Pécs, Kedves u. 24 Lustyik György"— Előadás másolata:

1

2 Programcsomag fejlesztése "multiplex microbead assay" eredmények kiértékelésére •Soft Flow Hungary Kft. •7628 Pécs, Kedves u. 24 Lustyik György http://www.softflow.hu

3 Multiplex Mikrogyöngy Assay (MMA) Orvosi, biológiai vizsgálati minta Reagensek, különböző színű mikrogyöngyök Reakció cella

4 M ultiplex M icrobead A ssay Fl Klaszter azonosító fluoreszcencia színek Reporter fluoreszcencia Minden szín-kombináció önálló klasztert alkot Minden klaszter más-más minta-komponens kimutatását végzi Egy minta-komponens a mennyiségével (koncentrációjával) egyenesen arányos riporter fluoreszcenciát „gerjeszt”

5 Áramlási citométer cella Fényszórás jelek

6 Detektált jelek: A klaszterek pozíciója alapján azonosítjuk a detektált minta-komponenst Fényszórás jel (SSC, DD) Az összetapadt gyöngyök kiszűrésére SSC Klaszter azonosító fluoreszcens színek (paraméterek) 1 vagy 2 fluoreszcens szín, színenként 8-16 fluoreszcencia intenzitás kombinációi C1 C2 Riporter paraméter(ek) A riporter paraméter intenzitásából történik az azonosított minta-komponens kvantitálása R1

7 Assay Kit Reagensekből, gyöngyök keverékéből és egyéb komponensekből álló készlet, amely alkalmas bizonyos számú vizsgálati minta analízisére. Reagensek, mikrogyöngyök Standard minták Kontroll minták A mérőkészülék ellenőrzésére szolgáló minták Mérési és kiértékelési utasítás Assay Specifikációs Fájlban (ASF) rögzített információ

8 Reakció cella ASF-ben rögzített térfogatú vizsgálati minta Standard minták Kontroll minták Kísérleti minták Betegek mintái Egyéb minták Assay Kit reagensek előírt mennyiségben összetételben Az MMA technológia kivitelezése

9 96 cellás ELISA lemezek

10 Az eredmények kiértékelése: 1. Adatfájl/mérőkészülék tipus felismerése 2. Mérőkészülék beállítás, pontosság ellenőrzése 3. A mikrogyöngy klaszterek azonosítása 4. A mikrogyöngy klaszterek és az Assay Kit által determinált minta-paraméterek egymáshoz rendelése 5. Kalibrációs görbe (függvény) készítése 6. Koncentrációk kiszámítása 7. Riport dokumentum(ok) elkészítése 8. Kötelező mentések

11 1. Adatfájl/mérőkészülék tipus felismerésének szabályai 3. A mikrogyöngy klaszterek azonosításának szabályai 5. Kalibrációs függvény megadása 4. A mikrogyöngy klaszterek és az Assay Kit által determinált minta-paraméterek egymáshoz rendeléséhez szükséges adatok 2. Mérőkészülék beállítás, pontosság ellenőrzéséhez szükséges adatok Mentés ASF

12 6. Koncentrációk kiszámítása 7. Riport dokumentum(ok) elkészítése 8. Kötelező mentések ASF információ ASF

13 Assay specifikációs fájl (ASF) generálása az assay kit alapján Kit gyártója Kísérletek tervezése Mérési eredmények kiértékelése Eredmények riport formátumba foglalása Kitek felhasználói

14 A program tervezése, megvalósítása az alábbi szervezetek, intézmények irányelvei alapján történt: Task Force for Antigen Quantitation: European Working Group on Clinical Cell Analysis Centers for Disease Control and Prevention (USA) Laboratory Centere for Disease Control of Canada National Committee on Clinical Laboratory Standards International Federation of Clinical Chemistry National Institute of Standards and Technology (USA) A funkcionális és klinikai célú tesztelés a Laboratory Centere for Disease Control, Health Canada, Ottava közreműködésével valósul meg.

15 Assay Specifikációs Fájlok generálása

16 10plex Cytokin Tplx.001 26NV01-001

17 10

18

19

20

21 y = a + { 1 + ( ) } x c df b

22

23

24

25

26

27 Kísérletek tervezése Mérési eredmények kiértékelése Eredmények riport formátumba foglalása SAT Flow felhasználói szoftver

28 Assay specifikációs fájlok (ASF) importálása a SAT Flow programba

29 Új kísérlet tervezése

30

31

32 A mérőcellák, csövek fizikai elrendezése

33

34 Adatfájl – minta hozzárendelés

35 Riport dokumentum formátuma

36

37 Koncentráció – FL-intenzitás függvény illesztése

38 Eredmények, adatok megjelenítése

39

40 Hátralévő feladatok: Funkcionális tesztelés Kísérleti/klinikai tesztelés Nyelvi modulok beépítése (pl. japán) Report készítés pdf formátumban

41 A program tervezése és a programozás Görömbey Péter programtervező matematikus Torday Robert Rácz Gábor Smudla Antal programozók lelkes munkája