A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat

Az előadások a következő témára: "A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat"— Előadás másolata:

1 A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat
DNA-Fingerprint

2 A munkacsoportok kémcsövei
DNA-Fingerprint

3 Tubes contain 10 µl of DNA sample 70 µl Enzyme mix 10 µl CS DNA 0,24 g
Suspect 1 – 5 Tubes contain 10 µl of DNA sample 70 µl Enzyme mix 10 µl CS DNA 0,24 g Agarose 80 µl Loadingbuffer 10 µl Marker DNA-Fingerprint

4 1. A minták előkészítése DNA-Fingerprint

5 Figyelem! Minden pipettázáshoz használjunk új pipetta csúcsot a szennyeződés elkerülésére. Mindegyik csövet zárjuk le és legkevesebb 30 mp-ig keverjük (rázzuk). . DNA-Fingerprint

6 1. A DNS minták csövei DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl
CS S S S S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint

7 1.1 Pipettázzunk 10 ul enzimkeveréket mindegyik csőbe
CS S S S S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Enzyme- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl (ENZ) DNA-Fingerprint

8 2. A minták fermentálása Tegyük a csöveket a vízfürdő állványba és inkubáljuk 20 percig 37 °C-os vízfürdőben. DNA-Fingerprint

9 3. Készítsük elő a gélelektroforézist
DNA-Fingerprint

10 3.1 Készítsük el az elektroforézis kamrát
Comb Metal rods Sledge Helyezzük bele a kamrába a szánt, a fém pálcákat(elektródákat) és a fésűt. DNA-Fingerprint

11 3.2 Készítsük el a géleket (0,8%)
Adjunk 0,24 g agarózhoz + 30 ml TAE-puffert egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikba. Melegítsük az Erlenmeyer lombikot rövid ideig a mikrohullámú sütőben, keverjük meg és melegítsük újra rövid ideig. DNA-Fingerprint

12 3.3 A kamra feltöltése a géllel
Öntsük az 55 °C-os gélt a géltartóba. Figyelem: Ellenőrízzük a hőmérsékletet a kézfejünk hátával. Ne mozgassuk a gélt amíg nem szilárdul meg. DNA-Fingerprint

13 3.4 Az elektroforéziskamra elkészítése
Miután a gél megszilár-dult , tegyük fel az elektroforéziskamra elektródáit. Töltsük fel a kamrát 270 ml TAE-pufferrel, hogy elfedje a gélt. Távolítsuk el a fésűt. DNA-Fingerprint

14 4. A DNS jelölő elkészítése
Pipettázzunk 10 µl töltő puffert (LB) into a10 µl DNS-jelölőbe(M). DNA-Fingerprint

15 5.10 µl töltő puffer hozzáadás
Pipettázzunk 10 –t a töltő pufferből a CS-be és az S1 –S5 csövekbe. 10 µl 10 µl 10 µl DNA-Fingerprint

16 6. A mélyedések feltöltése
A bal sáv szabad Pipettázzunk 20 µl-t minden mintából és 20 µl-t a DNS jelölőből (marker) (M) a résekbe. Emlékezz a sorrendre! Sávok:töltsd balról jobbra DNA-Fingerprint

17 6. A mélyedések feltöltése
Figyelem: A géltasakot nem szabad átszúrni. DNA-Fingerprint

18 7. Gél Elektroforézis ( 120 V-tal kb. 30 min)
Állítsuk le az elektroforézist amikor a kék sáv a gél vége előtt 1 cm-nél tart. DNA-Fingerprint

19 8. A DNS festése Helyezzük át a gélt a festő edénybe és fedjük fe 60 ml festő oldattal 2 percig. Öntsük vissza a festő oldatot az Erlenmeyer lombikba. DNA-Fingerprint

20 9. A gél kiértékelése Melyik gyanúsított az elkövető?
CS S1 S2 S3 S4 S5 M 9. A gél kiértékelése Melyik gyanúsított az elkövető? DNA-Fingerprint

21 9. Eredmény DNA-Fingerprint