STERILITÁS -- STERILITY

Az előadások a következő témára: "STERILITÁS -- STERILITY"— Előadás másolata:

1 STERILITÁS -- STERILITY
BIM SB 2008 STERILEZÉS FOGALMAK: STERILITÁS STERILITY ASZEPTIKUSSÁG -- ASEPTICITY ELSZIGETELÉS, IZOLÁLÁS CONTAINMENT Mikrobák elpusztítása Mikrobák távoltartása a környezettől Patogének Vírusok GMO-k rDNS termeléssel kapcsolatos problémák OECD 1986 – Recombinant DNA Safety Considerations EC 1990 Council Directive on the Contained use of GMOs vakcinatermelés Mikrobák távoltartása a rendszertől aszeptikus működés=steril működés I.: kis rizikó II.: a többi GMO

2 A biológiai biztonság 4 szintje EüM 61/1999 (WHO alapján)
1. szint - alap biológiai kockázatú (BSL 1 ) az a biológiai tényező, amely nem képes emberi megbetegedést okozni 2. szint - alap biológiai kockázatú (BSL 2 ) az a biológiai tényező, amely képes emberi megbetegedést okozni, veszélyt jelenthet elterjedése nem valószínű, az általa kiváltott betegség eredményesen megelőzhető, vagy kezelése hatásos 3. szint – fertőzésveszélyes (BSL 3 ) súlyos emberi megbetegedéseket képes okozni (akár halálosat), komoly veszélyt jelenthet szétterjedésének kockázata az emberi közösségben fennállhat, általában eredményesen megelőzhető, vagy kezelése hatásos 4. szint - kiemelten fertőzésveszélyes (BSL 4 ) súlyos emberi megbetegedést okoz, (akár halálosat) komoly veszélyt jelent a munkavállaló számára, az emberi közösségben való szétterjedésének nagy a kockázata, általában nem előzhető meg, vagy nem kezelhető hatásosan

3 A biológiai biztonság négy szintjére jellemző mikroorganizmusok
I. II. III. IV. BAKTÉ- RIUMOK Escherichia coli Lactobacillus sp. Vibrio cholerae Clostridium tetani Corynebacterium dyphtheriae Bacillus anthracis Yersinia pestis Mycoplasma mycoides GOMBÁK Saccharomyces cerevisiae Candida albicans Histoplasma capsulatum Coccidioides immitis VÍRUSOK Vakcinálás-hoz használt influenza törzs Hepatitis Influenza Herpes simplex HIV Sárgaláz Creutzfeldt- Jacob betegség (prion!) Ebola Marburg vírus Közép-Eui encephalitis (agyvelogyulladás) vírus (EU-ban csak III. szint)

4 Gyógyszerkészítmények Élelmiszeripar Szennyvíz
BIM SB 2008 STERILEZÉS Tápoldat Gyógyszerkészítmények Élelmiszeripar Szennyvíz végső elöntendő hulladékok FERTŐZÉS HOZAM CSÖKKENÉS FOLYAMAT VISELKEDÉS (KINETIKA) VÁLTOZÁS PLUSZ STERILEZÉSI IGÉNY TELJES SARZS TÖNKREMEHET (LÉPTÉKFÜGGŐ KÁR) PROBLÉMA A DOWN-STREAM-NÉL Extra munka, pénz

5 I. A fertőtlenítő hatás fokozatai:
Csíraszámcsökkentő hatás (szanációs effektus) Baktériumszaporodást gátló hatás (bakteriosztatikus hatás) Baktériumölő hatás (baktericid effektus) Spóraölő hatás (sporocid effektus) Vírusinaktiváló hatás (virucid effektus) Gombaelemeket pusztító hatás (fungicid effektus) Parazitákat pusztító hatás (paraziticid effektus) II. A fertőtlenítő eljárás csoportosítása: Kémiai Fizikai Kombinált fertőtlenítő eljárások

6 Mikrobák hőpusztulásának törvényszerűségei
STERILEZÉS Csíramentesítés, pusztítás ill növ. gátlás módszerei : Fizikai mechanikai módszerek: szűrés, elektromágneses besugárzás: UV, röntgen , gammasugár hőhatás. Kémiai módszerek: dezinficiálás Mikrobák hőpusztulásának törvényszerűségei

7 μ oC STERILEZÉS MIKROORGANIZMUSOK szaporodási hőfok tartományai
BIM SB 2008 STERILEZÉS MIKROORGANIZMUSOK szaporodási hőfok tartományai μ oC PSZIHROFIL MEZOFIL TERMOFIL EXTRÉM MÓDON

8 - a hőérzékenység függ a mikroba fajtájától
BIM SB 2008 STERILEZÉS - a hőérzékenység függ a mikroba fajtájától - vegetatív sejtek sokkal érzékenyebbek a hőhatásra, mint a “kondenzált létformájú"(csökkent szabad víztartalmú) baktériumspórák Vegetatív baktérium és élesztõsejtek Fonalas gomba konidiospórák Baktérium spórák 10-6 Vírusok-bakteriofágok 1-5

9 Vegetatív baktérium és élesztősejtek 1
Fonalas gomba konidiospórák Vírusok és bakteriofágok Baktérium spórák 106 E.coli és S.cerevisiae vegetatív sejtjei P.chrysogenum konidiospórái H1N1 influenzavírus Bacillus anthracis endospórái R e l a t í v h ő r e z i sz t e n c i a

10 (így az exponenciális növekedési fázis sejtjei
BIM SB 2008 STERILEZÉS -a hőérzékenység még adott spéciesz esetén is több tényezőtől függ: a sejt előéletétől, korától (így az exponenciális növekedési fázis sejtjei érzékenyebbek a stacionárius fázis sejtjeinél) -valamennyi sejt szenzitívebb nedves hővel szemben, mint száraz hővel szemben -a hőérzékenység (a hőpusztulás) nő a hőmérséklet emelkedésével, -a hőérzékénység függ a mikrobasejtet hordozó közegtől tápoldat pH-jától, viszkozitásától, ozmózis nyomásától, védőanyagok jelénlététől, edény falától

11 HŐPUSZTULÁS KINETIKÁJA ÁLLANDÓ HŐMÉRSÉKLETEN
BIM SB 2008 STERILEZÉS HŐPUSZTULÁS KINETIKÁJA ÁLLANDÓ HŐMÉRSÉKLETEN N élő csíraszám [db/cm3 k hõpusztulási sebességi állandó [min-1.

12 N/No N No t STERILEZÉS MÓDSZER k meghatározására tga=k BIM SB 2008 1
10-1 10-2 10-3 a tga=k MÓDSZER k meghatározására

13 No N t N/No 1 10-1 10-2 10-3 a tga=k MÓDSZER k meghatározására

14 hőmérséklet STERILEZÉS MITŐL FÜGG k? Mikroba ....fajta és „forma”
BIM SB 2008 STERILEZÉS MITŐL FÜGG k? Mikroba ....fajta és „forma” Közeg hőmérséklet

15 Módszer az Arrhenius-egyenlet konstansainak meghatározásra
ln k ln A α α A empirikus állandó (Geobacillus stearothermophylus : 9,5*1037 min-1) Ea- hőpusztulás látszólagos aktiválási energiája [KJ/mol (Geobacillus stearothermophylus : 70 kcal/mol) T -1 ( o K )

16 Mikroba ToC  kmin-1 Ea KJ/mol Bacillus subtilis
BIM SB 2008 STERILEZÉS Mikroba ToC  kmin-1 Ea KJ/mol Bacillus subtilis (vegetatív) (spórák) 121, Bacillus stearothermophilus , (spórák) , , Clostridium botulinum (spórák) , Hemoglobin (hõdenaturáció) ,3· Tápoldat komponensek hõbomlásának látszólagos aktiválási energiája kJ/mol Szénhidrátok és fehérjék közötti reakció ,6 B1 vitamin bomlása ,9 B2 vitamin bomlása ,8

17 D D t STERILEZÉS Tizedelési idő= decimal reduction time
BIM SB 2008 STERILEZÉS Átlagos élettartam D Tizedelési idő= decimal reduction time 1000 100 10 1 t D

18 STERILEZÉS Z Q10 Geobac. st. 10 oC 11,5 B1 56 oC 2,1 B2 50 oC 2,3
BIM SB 2008 STERILEZÉS Z Q10 Geobac. st. 10 oC 11,5 B1 56 oC 2,1 B2 50 oC 2,3 Maillard 3,0

19 lgD2 - lgD1 Z T ( oF ) Hőmérséklet D (min) Z ( T1 – T2 ) BIGELOW
= Z ( T1 – T2 ) BIGELOW 10 1 T ( oF ) B. stearothermophilus oC , ,1 Salmonella typhimurium 56 oC , ,2 Hőmérséklet D (min) Z

20 A hőpusztulás valószínűségi értelmezése
BIM SB 2008 STERILEZÉS A hőpusztulás valószínűségi értelmezése Kinetikai leírás ha No1 JÓ! Ha nem, egyre rosszabb!!! EZ IS sztohasztikus folyamat, Definíció: egy csíra élettartama alatt azt az adott hőfokon értelmezett időtartamot értjük, amely alatt a csíra még életben marad. Life span ahol: populáció átlagélettartama N0 élő csírák kezdeti száma Ni a ti élettartamú csírák száma Átlagos hőpusztulási sebességi állandó

21 Ha a hőmérséklet mindenütt azonos, növekedés nincs,
BIM SB 2008 STERILEZÉS Ha a hőmérséklet mindenütt azonos, növekedés nincs, az egyes csírák sorsa független a többi csíráétól. annak valsége, hogy adott t időpontban a túlélők száma éppen N (ahol N= 0,1,2,...No), binomális eloszlást követ: annak a valsége, hogy egy csíra az adott t idõpontban még túlélő

22 Mindíg 0-nál nagyobb annak a valószínűsége, hogy
BIM SB 2008 STERILEZÉS Mi annak a valsége, hogy valamennyi mikrobasejt elpusztult egy t időpontban? Mindíg 0-nál nagyobb annak a valószínűsége, hogy legalább egy túlélő csíra marad: Sterilezésnél N0 >>1 e-x ~ 1-x+...sorfejtés szerint

23 Mit jelent tehát a sterilezés biztonsága? Pl .:
BIM SB 2008 STERILEZÉS Mit jelent tehát a sterilezés biztonsága? Pl .: 99,9% P0(t)=0,999 1-P0(t)=0,001=10-3 Annak valsége, hogy a sterilezés nem sikerült, azaz maradt (legalább 1 túlélő:10-3 ) Annak valsége, hogy a sterilezés sikerült, azaz nem maradt 1 túlélő sem :0,999 Minden ezredik sterilezésnél megengedett egy sikertelen sterilezés Valószínűleg ezer sterilezésből egy nem sikerül Sterilezés után a rendszerben maradt élő csírák száma (db)

24 Technikai megvalósítás: Száraz hővel hőlégsterilizátor
BIM SB 2008 Technikai megvalósítás: Száraz hővel hőlégsterilizátor Nedves hővel (telített vízgőz) autokláv szakaszos to. sterilezés folytonos to. sterilezés

25 Laboratóriumi autokláv

26 oC gőz víz Elektromos fűtés látszakasz

27 Laboratóriumi autokláv
BIM SB 2008 Laboratóriumi autokláv

28 Gőzüzemű elől töltős autokláv
gőz be gőz ki köpeny ajtó

29 Fermentációs tápoldatok szakaszos sterilezése
BIM SB 2008 STERILEZÉS Fermentációs tápoldatok szakaszos sterilezése gõz hûtõvíz kondenz gõz víz víz kondenz direkt gõz

30 t STERILEZÉS Hőpenetrációs görbe Összemérhető szakaszok! 120-130 C
BIM SB 2008 STERILEZÉS Hőpenetrációs görbe Összemérhető szakaszok! fermentáció hõmérséklete o C 20-25 t 1 2 v MÉRETFÜGGŐ

31 hőpusztulás a fűtés alatt:
BIM SB 2008 STERILEZÉS hőpusztulás a fűtés alatt: hőpusztulás a hőntartás alatt: hőpusztulás a hűtési szakasz alatt: Például: 0,20 0,75 0,05

32 N0 ln N STERILEZÉS Méretérzékeny! 10-3 N0 = 105 / ml = faktor
BIM SB 2008 STERILEZÉS N0 faktor = ln Méretérzékeny! N N0 = 105 / ml 10x-enként 2,3-mal nő

33 Fermentációs tápoldatok folytonos sterilezése Fermentor méret határ
BIM SB 2008 STERILEZÉS Fermentációs tápoldatok folytonos sterilezése Fermentor méret határ Kihasználtság: (kg termék/fermentor m3.év). Folytonos művelet előnyei: -nagyobb hőmérsékleten ( oC) végezhető -a rövidebb idejű sterilezés -sterilezés biztonsága nő, egyenletes: st-st-ben működik -kisebb a tápoldat komponensek hőbomlása -nem kell keverni a st. alatt (nem lev. kev telj. nagyobb) -fehérjéket, cukrokat külön lehet sterilezni és keverőtartályban egyesíteni -a folytonos folyamat reprodukálható, -egyforma minőségű steril tápoldatot szolgáltat ez növeli a fermentációs hozamot, -a folytonos sterilező berendezések, a művelet könnyen szabályozható, automatizálható.

34 összeszerelt lemezes hőcserélő lemezek zárólemez csőcsatlakozások

35 BIM SB 2008 STERILEZÉS Műveleti megoldások: GŐZINJEKTOROS

36 BIM SB 2008 STERILEZÉS LEMEZES HŐCSERÉLŐS

37 BIM SB 2008 STERILEZÉS SPIRÁLHŐCSERÉLŐS

38 Különböző spirális hőcsrélők
Spirális hőcserélő modellje és a szétszerelt modell BE KI ki

39 STERILEZÉS BIM SB 2008

40 STERILEZÉS BIM SB 2008

41 Folytonos sterilező állomás kapcsolása
BIM SB 2008 STERILEZÉS Folytonos sterilező állomás kapcsolása STERIL BYPASS TÁPOLDAT TARTÁSI SZAKASZ TÁPOLDAT 30 s o C TISZTITÓ KÖR HÛTÕVIZ REGENERÁLÓ BYPASS gõz FÛTÕ REGENERÁLÓ FÛTÕ-HÛTÕ HÛTÕ VIZ MÉRÉSI PONTOK TISZTITÓSZEREK

42 BIM SB 2008 STERILEZÉS Folytonos tápoldat sterilezõk (tervezési) számitása L - tartási szakasz hossza (m) w -tápoldat térfogatárama (m3/min) q - tartási szakasz csõ keresztmetszete (m2) A tartási szakaszra: Dugóáram (plug flow) Turbulens áramlás Lamináris áramlás u = max 5 , * DE!!!

43 A dugóáramtól való kis eltérés esetén (1/Pe kicsi)
BIM SB 2008 STERILEZÉS Damköhler szám vagy reakciószám, Peclet szám. A dugóáramtól való kis eltérés esetén (1/Pe kicsi) Ha Pe= , dugóáram jellemzi az áramlási viszonyokat

44 nomogram használatához) ismernünk kell k,
BIM SB 2008 STERILEZÉS nomogram használatához) ismernünk kell k, L és D értékét

45 BIM SB 2008 STERILEZÉS

46 E(t) (tartási szakasz) tartózkodási idő eloszlás függvénye,
BIM SB 2008 STERILEZÉS Szegregált: sejtek illetve spórák kis, egymástól teljesen független csomagocskák a hõbehatás szempontjából. E(t) (tartási szakasz) tartózkodási idő eloszlás függvénye, Nb túlélõ mikrobák száma egy megfelelõ szakaszos reaktorban E(t) függvény Laplace-transzformáltja (ahol k =s, a Laplace-transzformáció paramétere).

47 STERILEZÉS FORRÓ PONTOK ELEKTRÓDOK BIM SB 2008 ALSÓMEGHAJTÁS
KEVERŐ TENGELY TÖMÍTÉS ALSÓMEGHAJTÁS ELEKTRÓDOK

48 STERILEZÉS FORRÓ PONTOK BIM SB 2008 FELSŐMEGHAJTÁS KEVERŐ TENG.
TÖMÍTÉS INOKULUM FORRÓ PONTOK LEVEGŐ EL SAV,LÚG,HBG FELSŐMEGHAJTÁS LEVEGŐSZŰRŐ AEROSOL MINTAVEVŐ ÜRÍTÉS

49 STERILEZÉS KEVERŐTENGELY BE-,KI-LEVEGŐ ADALÉKOK: CSÖVEK SZELEPEK
BIM SB 2008 STERILEZÉS KEVERŐTENGELY BE-,KI-LEVEGŐ ADALÉKOK: CSÖVEK SZELEPEK INOKULUM VONAL SZENZOROK SZIVATTYÚK DOWN-STREAM: STERIL NEMSTERIL

50 levegő gőz tengelyhez víz tengely Motor,áttétel, CSÚSZÓ FELÜLET
STERIL VÍZ - KENÉS tengely CSÚSZÓ FELÜLET Motor,áttétel,

51 A csúszógyűrűk kenése kondenzvízzel
BIM SB 2008 A csúszógyűrűk kenése kondenzvízzel

52 levegő gőz víz tengelyhez

53 BIM SB 2008 STERILEZÉS STERIL OLTÁS

54 BIM SB 2008 STERILEZÉS STERIL OLTÁS 2

55 Labor és pilot plant oltás üzemi oltás
gőz oltócsonk inokulum gyorskötések (láng alatt) steril levegő termelő fermentor Labor és pilot plant oltás üzemi oltás Flexibilis csőszakasz

56 BIM SB 2008 STERILEZÉS TERMODINAMIKUS KONDENZEDÉNY

57 BIM SB 2008 STERILEZÉS MEMBRÁNSZELEPEK VISSZACSPÓSZELEP

58

59 diafragma membránszelep
nyitva zárva belső csöves memebránszelep zárófelületek belső szilikoncső

60 megtervezni mégis nagy kihívás”
BIM SB 2008 „ A gőzsterilezés alapjai jól ismertek, de egy aktuális, jól működő rendszert megtervezni mégis nagy kihívás” 30 év, W.D.Wise (Eli Lilly), ChemicalProcessing.com Mit tegyünk? -légtelenítés (telített gőz!), a levegő „higítja” a gőzt, légzsákok pre-vákuum ciklusok:csövekből, porózus alkatrészekből, vattadugó, géz -minden alacsonyan lévő ponthoz kondenzedény, v. k-lefúvató. csövek a legalacsonyabb pont felé lejtsenek, hőmérők az alacsony pontokra A túlnyomás nem elég: ha lyuk van pl. steril levegővezetékben, be fog fertőződni ( Venturi effektus beszívja a nem st. levegőt) St után, ellennyomás st.levegővel vákuum elkerülésére (gőz kondenzál vákuum!) -Könnyen tisztítható kivitelek Mit ne tegyünk? -Légzsákok „6D szabály”, ma inkább 2,5D a mérvadó -Ne használjunk közös elvezető csöveket -Ne legyen stagnáló felső szakasz -Ne hidd, hogy a levegő leszáll, mert nehezebb a gőznél

61 BIM SB 2008

62 BIM SB 2008

63 BIM SB 2008 STERILEZÉS PALL LEVEGŐSZŰRÉS EMFLONR

64 gőz lefúvató gőz be g ő z sz ű r gyertya leveg be ki kondenz á tum
BIM SB 2008 g ő z sz ű r gyertya leveg be ki kondenz á tum gőz be gőz lefúvató

65 gőz lefúvató gőz levegő szűrőház szűrőelem Steril levegő gőz be
kondenz á tum kondenz

66 A gázszűrő sterilezése. A tápoldattal egyszerre, vagy külön.
BIM SB 2008 A gázszűrő sterilezése. A tápoldattal egyszerre, vagy külön. fontos: hőmérséklet monitorálása, integritástesztek!!

67 Incinerator: elmenő gáz sterilezése
BIM SB 2008 Incinerator: elmenő gáz sterilezése

68 BIM SB 2008 STERILEZÉS CIP (CLEANING IN PLACE)

69 Szórófejek és elhelyezésük
BIM SB 2008 Szórófejek és elhelyezésük B) Keverős reaktor két szórófejjel A) Szórófej 360o –os szórással, m3/h; C) Szóró szelep; a) szórófej kilépés; b) tartályba szerelés; c) kondenz el; d) Pneumatikus aktuátor; e) tisztító detergens vagy gőz; f) tisztító detergens kilépés D) szórószelepek közvetlenül a isztítandó kritikus felületre irányítva

70 (velocity/pressure), Chemical concentration and Time ofexposure.
BIM SB 2008 Action The CIP Skid controls the cleaning (“T.A.C.T.”) parameters of Temperature, Action (velocity/pressure), Chemical concentration and Time ofexposure.

71

72 csapvíz gőz levegő C1 C2 C3 CIP oldat vissza CIP-konyha hőcserélő Mosó
sav lúg deter gens Mosó víz C1 C2 C3 CIP oldat vissza hőcserélő CIP-konyha

73 Bioengineering AG engedélyével
Sagenrainstrasse 7, 8636 Wald, Switzerland

74 I. A fertőtlenítő hatás fokozatai:
Csíraszámcsökkentő hatás (szanációs effektus) Baktériumszaporodást gátló hatás (bakteriosztatikus hatás) Baktériumölő hatás (baktericid effektus) Spóraölő hatás (sporocid effektus) Vírusinaktiváló hatás (virucid effektus) Gombaelemeket pusztító hatás (fungicid effektus) Parazitákat pusztító hatás (paraziticid effektus) II. A fertőtlenítő eljárás csoportosítása: Kémiai Fizikai Kombinált fertőtlenítő eljárások

75 Kémiai sterilezés = dezinficiálás
A legfontosabb hatóanyagok: Etilénoxid Ózon Alkoholok Fenol Formaldehid Glutáraldehid Guanidinek Hidrogén peroxid Jodofórok Klór és klórvegyületek Kvaterner ammónium vegyületek Ortoftálaldehid Perecetsav

76 Antiszeptikum: olyanok, amelyek kevéssé veszélyesek: bőr, nyálkahártya,
de nem megehetők!!! alkoholok, Hg, ezüstnitrát, I2-oldat,detergensek Dezinficiálószer: megölik a mikrobákat de spóráikat nem feltétlenül. Nem biztonságosak emberi szövetekre Élettelen felületek, padló, fal…. hipokloritok, CuSO4, kvaterner ammónium vegyületek, formalin, fenolok

77 Gázsterilezés: Etilén oxid (ETO)
forráspont 10.4ºC azaz gáz halmazállapotú szobahőmérsékleten EtO reagál aminosavakkal, proteinekkel, DNS-sel reprodukciót megakadályozza. Sterilezés után kilevegőztetés a gáznyomok eltávolítására, Műanyagba csomagolt edények:Petri csészék, pipetták, injekciós fecskendők, -tűk, egyéb orvosi felszerelés gázsterilező

78 Ózon sterilizáció: O2 elektromos mező O atomok O3 víz (ivó és szennyvíz) és élelmiszerek (hús, tojás)dezinficiálása Mind folyadék mind gáz formában Los Angeles a világ legnagyobb ózonos víz-kezelő üzemét üzemelteti Uszodák, palackozott vizek konténereinek sterilezése

79 Dezinficiálás: Cu, Hg, Ag történeti,
alkoholok, szerves savak ( tartósítás: tejsav, ecetsav,szalicilsav, benzoesav) Klór-leadó vegyületek: NaOCl pH> 9 Na.diklór-izocianurát pH= ,5-1% H2O2 : 4% oldat H2O +O2 biocidok Perecetsav : 3% oldat Evetsav+O2 Kvaterner ammóniumvegyületek: min 0,2 % benzalkónium klorid, Alkil-dimetilbenzil-ammónium kloridok keveréke; alkoholos polivinilpirrolidon-iodid (10% w/v, szappan) Na- lauryl ether szulfát (25 % w/v); Glutáraldehid : baktericid, sporocid, virucid,fungicid 2% , lúgos pH:8,3 oldatban

80 Klórhexidin: kémiai antiszeptikum. Klórhexidin-diglukonát
Elpusztítja (baktericid) a gram-pozitív és gram-negativ mikrobákat, bakteriosztatikum is. 0,05% Mechanizmus: membrán roncsolás. Klorhexidin termékek nagy cc-ban szemtől és fültől távoltartani , de kontaktlencse is:0,005-0,006 %os cc.ben Formaldehid: sporocid, virucid,fungicid 0,5-1% vizes oldat, v gőzök ill gáz. Etanol, izopropanol : 70%, nem sporocid! Csak a csírázó spórákat pusztítja

81 Table I: Methods of sanitization and sterilization. Method
Concentration of Active Ingred. Tempera-ture (F/C) Contact Time (min) Effective Against Live Bacteria  Effective Against Spores  Boiling heat >175/80 15-30 + - Autoclave/ pressure cooker 250/121 Dry heat/ Oven 350/177 60-180 Incinerator >700/370 <0.1 UV radiation 400 W/cm2 10-30 +/- Detergent 1% (v/v) 5-30 Chlorine 0.01-5% (v/v) Alcohol 70-85% (v/v)